在分子生物学中，良好的缓冲液选择和不同DNA分离步骤的准备可能是转向蛋白质表达或开放另一个maxi-prep试剂盒重新开始之间的区别。尽管它们至关重要，但缓冲配方通常只是在没有对不同组件的解释或理由的情况下编写的配方。一种这样的缓冲液是葡萄糖 - 三 - EDTA或GTE缓冲液。
$config[code] not found什么是GTE用于？
GTE用于在裂解（打开）细胞并收获内部的质粒DNA之前重悬细菌细胞沉淀。溶解酶使细胞膜软化，通常与GTE缓冲液一起加入。在该步骤期间实现全细胞的均匀悬浮，使得随后添加的裂解溶液可以到达所有细胞，这是获得良好DNA产量的关键。 GTE旨在实现这一目标，同时为DNA提供稳定的环境。
渗透压的葡萄糖
将50mM（毫摩尔）葡萄糖糖加入到GTE缓冲液中以维持渗透压，其中细胞外的溶质浓度接近细胞内的溶质浓度。这可以防止过早的细胞裂解，这可能由于聚集和降解而导致较低的DNA产量。缓冲液的其他成分也有助于溶液的渗透压，但作为非电解质的葡萄糖是一个很好的选择，因为它不会干扰溶液的缓冲性能。
Tris用于pH稳定性
Tris是三（羟甲基）氨基甲烷的简称，它是一种非常常见的pH缓冲剂。在GTE缓冲液的情况下，将酸盐（Tris-HCl）以25mM的浓度添加到缓冲液中。这使溶液的pH维持在接近生理8.0，这是用于防止质粒DNA的酸水解（降解）和其他细胞组分的不希望的副反应的理想pH。
EDTA可防止DNA降解
EDTA或乙二胺四乙酸从溶液中捕获或“螯合”金属离子，防止它们参与不需要的副反应。在GTE缓冲液中，EDTA以10mM加入。它的主要目的是在缓冲液中收集游离的锌，镁和钙，从而通过某些需要这些金属的途径防止DNA降解。
一些重要提示
保持GTE缓冲液冷却并少量使用，以防止其中的非预期细菌生长。糖和受控的pH值构成了生长良好的培养基。始终使用纯净水。自来水可能会从管道中释放出过量的金属离子，这可能会超过EDTA捕获的能力。如果您怀疑样品中存在干扰RNA，则将每毫升100微克的RNase A添加到您的GTE缓冲液中以消除该问题。
